




---提取仪配套试剂及其操作步骤,买了仪器后一定要考虑后续使用配套试剂的问题:
1)配套试剂是否齐全。不同样本类型的提取试剂盒产品链是否完整
2)配套试剂是不是预封装。非预封装的试剂需要实验员用移液器加入裂解液、洗涤液和洗脱液等试剂,并没有减少人工操作时间;
3)提取前除了加样本外。是否需要添加蛋白酶k,由于有些公司并没有掌握裂解液中预封装蛋白酶k且常温储存的技术,蛋白酶k需要-20℃单独保存,需即用即加。每个样本多加一步蛋白酶k,96个样本多了10~15min左右的操作时间。
4)配套试剂的保存温度。有些厂家的提取试剂需要在2—8℃运输保存,冷链运输增加运输成本,保存需要在冰箱中,而预封装提取试剂体积较大,在用量大---像---这样大批量的使用,完全没有足够冰箱可以进行一段时间试剂的储存空间。
5)提取后的扩增效率。提取---时观察磁珠残留率并且检测提取---!
磁珠法自动---提取仪又分为磁棒法和抽吸法
先说抽吸法:顾名思义,抽吸法就是通过自动移液装置来进行,通过自动移液装置来加入裂解液、磁珠吸附;抽走裂解液,加入漂洗液,磁珠吸附,抽走漂洗液,加入洗脱缓冲液。从步骤上好像没什么问题,但是抽吸法的问题在于,为了在去除废液的时候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠连同废液被抽掉,auto-32a全自动---提取仪,这样每一次抽废液的时候总有一小部分不能完全的抽走,---是磁铁在底部的装置,因为磁珠被磁铁吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近,这样漂洗液就不能完全去除,残留的漂洗液中的盐和---会影响后面的洗脱效率和pcr成功率;磁铁在侧面的装置残留的液体会少些,但是洗脱的效率也不好,依靠dna自行溶解到洗脱缓冲液中,除非等上半小时以上,所以有些96自动---提取工作站,提取一轮的时间需要150分钟,32磁棒法的同样的时间可以提5轮了。
再说磁棒法---提取仪:通量通常有8、16、32、96通道,相对于抽吸法,auto-32a全自动---提取仪报价,磁棒法的优点是每一步的液体不残留,因为磁棒只带走磁珠,转移到下一个步骤相应的反应孔中,另外选择磁棒法的提取仪器尽量要功能更齐全的,比如可以加热,每个加热槽独立温控,这样可以设置加热、裂解、洗脱的不同温度,另外很重要的一点是,带动磁棒的电机要能带动磁棒进行液体的快速混匀和搅拌,auto-32a全自动---提取仪,这样才有利于自动化和有助于裂解和漂洗。磁棒法的通量选择尽量是32通道,96通道的看似通量更高,但是有个很现实的问题,96个磁力棒在从一个板转移至另外一个板的时候,磁力棒上面的液体中途滴下来怎么办,它会滴到别的孔中造成污染,而32通道的磁力棒运行轨迹不经过其他样本的上空,这样不会交叉污染。
采用离心柱法的仪器:离心柱法---提取仪主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法,通量一般在1-12个样本,auto-32a全自动---提取仪价格,操作时间和手工提取差不多,并不能提高实际工作效率,且价格昂贵,不同型号仪器的耗材也不能通用,仅适合经费充足的大型实验室使用。
采用磁珠法的仪器:以磁珠为载体,利用磁珠在高盐低ph值下吸附---,在低盐高ph值下与---分离的原理,再通过移动磁珠或转移液体来实现---的整个提取纯化过程。由于其原理的---性,所以可设计成很多种通量,既可以单管提取,也可以提取8-96个样本,且其操作简单快捷,一批次上机提取时间为9~40min(不同样本不同厂家时间不同),---提高了实验效率,且成本低廉,因而可以在不同实验室使用,是目前市场上的主流仪器。
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